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在实验中抗体的挑选办法你知道多少?
发布时间:2020-04-14   点击次数:120次

1.剖析实验使用的类型 

 

一般抗体阐明书都列出该抗体经实验验证过适用于何种剖析类型,假如抗体阐明书没有提及的使用类型,并不意味着该抗体不适用于此种剖析使用类型,而仅是阐明尚未经过此种剖析实验验证,假如抗体不适用某些剖析实验,则会在抗体阐明书上标注出来不适于某剖析实验。

 

2.样本的物种

 

应挑选物种相同或有穿插反响的抗体,抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有穿插反响,因其氨基酸序列同源性较高,假如样本的种类未列入抗体阐明书上的穿插反响种属表中,并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白,而仅仅表明该物种尚未用此抗体检测验证过,应经过序列比对的办法来猜测穿插反响,可使用Expasy 和 NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对。

 

3.样本蛋白的结构性质 

 

了解样本蛋白的结构性质有助于挑选*适宜的抗体,至少两方面因素需求考虑:

1).待测样本蛋白的结构域:抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来,其中的免疫原包含:全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体(如:细菌)或细胞,抗体阐明书一般都有免疫原的描绘,假如打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域,则必须挑选用含此片段域的免疫原制备出的抗体。

2)。样本的提取或处理进程:某些抗体要求样本经过某些特殊处理,例如:许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本,另一方面,某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。

 

4.一抗宿主物种的挑选 

 

一般说来,在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时,一抗宿主动物的物种挑选较为重要,关于免疫组化而言,尽可能挑选与样本不同种系物种的一抗,从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白发生穿插反响

 

5.二抗的挑选

 

二抗应选用与使用的一抗相同的物种来历,主张检查二抗阐明书保证该抗体适用于你的检测使用, 二抗一般连接荧光素FITC或发光团。

 

6.两层染色抗体的挑选

 

用未偶联一抗进行细胞培养物或安排切片的两层免疫染色要求一抗来历于不同物种而且二抗别离识别其中,二抗阐明书应描绘其与其它物种来历的免疫球蛋有否有穿插吸附。

 

7.荧光和化学发光符号 

 

连接于二抗的符号物是为了检测抗体的结合,挑选符号物依赖于几个参数:

 

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